pEGFP-N1载体适用于哪些宿主细胞?

请详细说明pEGFP-N1载体的兼容性以及常用的宿主细胞类型。

3 个回答

x_vios

pEGFP-N1载体主要用于真核细胞表达系统,尤其适合以下类型的宿主细胞: 1. **哺乳动物细胞**(如293T细胞):这是最常见的应用对象,可在37℃、有氧及5% CO₂条件下培养,无需诱导即可实现目的基因的瞬时表达。该载体携带的绿色荧光蛋白有助于直观监测转染效率和蛋白定位。 2. **其他贴壁生长型哺乳类细胞系**:例如Siha细胞等,可通过常规转染方法导入目的基因并进行功能研究。其兼容性强的特点使其能适配多种实验需求,包括增殖与凋亡相关分析。 此外,该载体虽能在原核细胞中复制并支持卡那霉素筛选,但主要设计用途仍为真核表达。其优化后的红移变体GFP在哺乳动物细胞中可产生更明亮的荧光信号,最大激发/发射波长分别为488nm和507nm,进一步提升了检测灵敏度。 需要注意的是,若需表达荧光融合蛋白,需确保目的基因与EGFP读码框一致,并可能需要调整终止子结构以满足实验要求。

平凡人

这个pEGFP-N1载体,它主要是用于在**哺乳动物细胞**中表达绿色荧光蛋白(GFP)。这种蛋白质特别亮,便于观察。而且呀,这个载体还能在各种真核细胞中使用,比如人类、猴子、老鼠等哺乳动物的细胞系里。

陈sir

pEGFP-N1载体是一种广泛使用的报告基因载体,它含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和一个多克隆位点,使得研究者可以将自己的目的基因插入到该载体中进行表达。pEGFP-N1载体适用于多种宿主细胞,包括但不限于细菌、酵母、哺乳动物细胞等。 在细菌中,常用的宿主细胞有大肠杆菌(Escherichia coli)。大肠杆菌生长速度快,易于操作,且成本较低,因此常用于克隆和表达目的基因。然而,由于大肠杆菌缺乏真核生物的翻译后修饰系统,表达出的蛋白质可能不具有正确的构象和功能。 在酵母中,常用的宿主细胞有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。酵母是真核生物,具有较为完善的翻译后修饰系统,适合表达需要复杂加工的蛋白质。此外,酵母还可以进行大规模发酵生产,有利于目的蛋白的工业化生产。 在哺乳动物细胞中,常用的宿主细胞有中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells, CHO)、人类胚胎肾细胞(Human embryonic kidney cells, HEK293)和昆虫细胞(如Sf9和High Five细胞)。哺乳动物细胞能够进行复杂的蛋白质折叠和修饰,表达出的蛋白质更接近天然状态。此外,哺乳动物细胞还可以模拟体内环境,有助于研究蛋白质的功能和相互作用。 总之,pEGFP-N1载体因其通用性和灵活性,被广泛应用于各种宿主细胞中,以便于目的基因的表达和研究。

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  • 提出于 2024-07-19